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HotScript M-MuLV RTase对M-MuLV经过多点突变，提高了反转录温度耐受性，可以在高达55℃～60℃（更高温度反转时活性会部分减低）进行反转录，大大的提高了GC含量高，二级结构丰富的RNA模板的反转录效率。

HotScript M-MuLV RTase缺失了RNase H活性，与野生型M-MuLV相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。合成cDNA片段长度最高可达12kb。

• 避免RNase污染。
  
• 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
  
• 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase-free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
  
• HotScript M-MuLV RTase溶液非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。可以每次按照0.8μL使用，也不影响使用效果。

• 配置反应体系(20μL)
  

  成分	用量
  Total RNA/mRNA	50ng～5μg/5～500ng
  Oligo(dT)18(0.5μg/μL) or Random Primer(0.1μg/μL) or GSP(Gene Specific Primer)	1μL
  	1μL
  	2pmol
  dNTP Mixture (10mM each)	1μL
  5×RT Buffer	4μL
  RNase Inhibitor(40U/μL)	0.5μL
  HotScript M-MuLV RTase(200U/μL)	0.8～1μL (见注意事项4)
  RNase-free H2O	至20μL

  
  
• 轻轻混匀
  如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，50℃～55℃孵育30～50min。
  如用Random Primer，23℃孵育10min，50℃～55℃孵育30～50min。
  
• 85℃加热5min失活HotScript M-MuLV RTase。
  注意：GC含量高(>50%)或者二级结构复杂模板，可以提高反转录温度至60℃左右。